細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境、操作者鼻腔口腔、實(shí)驗(yàn)器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的頻率很高。據(jù)美國(guó)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。

同時(shí)，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過(guò)電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實(shí)驗(yàn)者肉眼發(fā)覺(jué)。而支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程，普通抗生素對(duì)其無(wú)效。因此，被支原體污染的細(xì)胞會(huì)持續(xù)受到影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。

支原體污染不僅是細(xì)胞培養(yǎng)中需要克服的現(xiàn)象，而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么？

●抑制細(xì)胞增殖達(dá)50%

●影響免疫反應(yīng)

●影響病毒增殖和感染率

●引起染色體畸變和易位

●干擾雜交瘤技術(shù)使被污染細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基geng敏感

●在細(xì)胞壁上附著支原體會(huì)改變細(xì)胞壁完整性。

●降低電穿孔轉(zhuǎn)染率達(dá)5%

總之，支原體污染影響細(xì)胞所有的代謝功能。

細(xì)胞被支原體污染，解決方案

方法一：確認(rèn)細(xì)胞已被支原體污染，終止試驗(yàn)，丟棄所有被污染的細(xì)胞和耗材。

重新復(fù)蘇細(xì)胞，注意選用未被污染的細(xì)胞株、血清和培養(yǎng)基，并規(guī)范操作。

方法二：對(duì)于珍貴的，樣品不可再得的細(xì)胞，或價(jià)格昂貴的種子細(xì)胞，不但無(wú)法丟棄，而且作為種子細(xì)胞，還需要**支原體污染。

此時(shí)，需選用特異性的支原體殺除劑，清除污染，保護(hù)細(xì)胞。

方法三：對(duì)于已耗費(fèi)很多時(shí)間，大量擴(kuò)增起來(lái)的細(xì)胞，或經(jīng)過(guò)基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過(guò)的細(xì)胞，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了，怎么辦？此時(shí)由于前期工作量巨大，使操作人員無(wú)法丟棄已有細(xì)胞。

但由于價(jià)格原因，又無(wú)法使用方法二提到的昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體，

同時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染，讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn)，以蕞終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

此時(shí)，實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體te效的抑制劑，通過(guò)對(duì)細(xì)胞的前期處理，中期加藥，逐步通過(guò)4代左右的培養(yǎng)，得以將支原體污染*清除，確保試驗(yàn)順利推進(jìn)，結(jié)果準(zhǔn)確。

工作環(huán)境中支原體污染，解決方案

如果實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞經(jīng)常發(fā)生支原體污染，則需考慮的污染源可能來(lái)以下幾個(gè)方面：

1、細(xì)胞種子被污染，解決方法參見(jiàn)以上“方法二”和“方法三”；

2、細(xì)胞培養(yǎng)中，使用未經(jīng)嚴(yán)格過(guò)濾祛除支原體的牛血清。

某些血清生產(chǎn)廠，為低價(jià)占領(lǐng)市場(chǎng)同時(shí)還能獲得充足利潤(rùn)，他們需要降低生產(chǎn)成本，所以會(huì)將生產(chǎn)中，成本蕞高的100nm過(guò)濾三次的步驟縮減，導(dǎo)致血清成為支原體的污染源。

(全球標(biāo)準(zhǔn)的血清生產(chǎn)規(guī)范為：粗血清需經(jīng)七次過(guò)濾，蕞后三次為100nm加壓過(guò)濾，可以清除支原體)；

此情況需詳細(xì)考察血清供貨商的專業(yè)程度，通過(guò)索要《檢測(cè)報(bào)告》等書面文件為血清獲得geng多質(zhì)量保證。同時(shí)，對(duì)專業(yè)水平不高的血清供貨商，適當(dāng)延長(zhǎng)血清試用期。

3、潔凈臺(tái)、細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)部、培養(yǎng)箱水槽、液氮罐，培養(yǎng)間內(nèi)部的水浴鍋等環(huán)境被支原體污染，可對(duì)工作區(qū)域進(jìn)行消毒。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時(shí)帶來(lái)的危害會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測(cè)和及時(shí)排除支原體污染，讓細(xì)胞在健康安全的環(huán)境下生長(zhǎng)，為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ)。