細胞培養作為很多實驗的基礎，在生物工程領域的重要性不言而喻?，F在，隨著昆蟲桿狀病毒表達載體系統（BEVS）的廣泛應用，昆蟲細胞的體外培養也越來越受到重視。從1915年，昆蟲細胞培養起始，經過一百多年的發展，已在細胞、分子、醫學等方向廣泛應用。目前，常用于培養的昆蟲細胞以草地貪夜蛾細胞株Sf9和Sf21，以及粉紋夜蛾細胞株Tn5B1-4（商品名High Five）為主。

　　下面遠慕以Sf9為例，具體講解一下昆蟲細胞培養的要點：

　　細胞基本信息：

　　Sf9昆蟲細胞系來自雌性草地貪夜蛾卵巢組織，是利用桿狀病毒表達系統進行重組蛋白表達的合適宿主。雖然以往人們利用由培養瓶和含血清基礎培養基組成的靜止培養系統進行昆蟲細胞的培養，但是一般而言昆蟲細胞并無貼壁依賴性，更適于進行懸浮培養。

　　細胞特性：

　　（1）細胞靜置培養時半貼壁生長，也可以使用搖瓶懸浮培養；

　　靜置培養時細胞會大量附著瓶底生長，呈半貼壁狀態，會有少部分細胞懸浮生長；搖瓶培養時可以很快適應懸浮生長，呈單個或小聚團懸浮生長。

　?。?）對溫度極為敏感；

　　細胞需盡量控制在26~28℃培養，以保證細胞生長狀態；若溫度低于26℃，細胞生長速度會變慢，但恢復溫度后生長速度會逐漸恢復，不會對細胞產生過大傷害；若溫度28℃~30℃，細胞生長嚴重受限；若溫度高于30℃，細胞將受到不可逆傷害，即使溫度恢復也無法恢復正常生長狀態；同時注意使用的培養基、PBS及其他試劑應保持室溫（最好26~28℃），另外盡量減少觀察細胞次數和時間。

　　（3）細胞可以適應多種培養體系。

　　該細胞多用于真核細胞蛋白表達系統，因此針對該細胞有諸多培養體系，例如Grace's Insect Medium、SF900 II、TNM-FH、ESF921等培養體系，包括含血清的培養體系和不含血清的培養體系，可以根據自身實驗需要選擇逐步更換為合適的培養體系。

　　昆蟲細胞培養注意事項：

　　昆蟲細胞傳代/凍存/復蘇的一般步驟與哺乳動物細胞相同，但有些關鍵點又有所不同。

　?。?）昆蟲細胞應于28°C、非濕化環境中培養。培養昆蟲細胞時建議不要進行CO2交換，所以培養瓶選擇密閉蓋；

　?。?）使用昆蟲細胞專用的培養基；

　?。?）貼壁昆蟲細胞：細胞密度低于匯合狀態的20%時，細胞生長會受到抑制。健康狀態最hao的細胞是對數期收獲的細胞，故昆蟲細胞應在對數期傳代。但是，如果培養的是強貼壁性昆蟲細胞，則應在細胞達到匯合狀態或者剛剛開始從培養瓶底部脫離時進行傳代，因為此時細胞容易脫離；

　?。?）某些昆蟲細胞系可能需要一定的過程來適應懸浮培養。進行細胞懸浮培養時無需更換培養基。定期傳代時需要吸出細胞懸液，然后加入適量培養基，將細胞稀釋到適當的密度。添加新鮮培養基后可使細胞營養素達到wan全補充；

　　（5）貼壁昆蟲細胞在無血清培養條件下，昆蟲細胞與基質貼附極為牢固，需要花費較大力氣才能使其脫落。要使細胞脫落，最佳的方法是蓋緊瓶蓋，并以瓶蓋朝上的方向抓住培養瓶，在臺面上以中等力量敲擊瓶底2~3次，這樣將會有足夠的細胞解離下來用于傳代。

　　注意：

　　千萬不要劇烈搖晃培養瓶，昆蟲細胞對吹打、氣泡等機械損傷非常敏感，若吹打力度過大、氣泡過多將嚴重影響細胞生長狀態，甚至造成細胞損傷。